Avaliação do efeito de células-tronco mesenquimais humanas de várias origens na atividade de linhagem de células tumorais HepG-2 / Evaluation of the effect of human mesenchymal cells from several sources in the activity of tumor cells line

INTRODUÇÃO O câncer é uma das principais causas de morte no mundo, sendo responsável por cerca de 8 milhões de mortes por ano, segundo dados da OMS. As mortes por câncer são provocadas por tumores que se originam em órgãos como pulmão, fígado, estômago, intestino, mama e esôfago. As células-tronco mesenquimais (CTM) foram identificadas em vários órgãos e estudos da sua interação com células tumorais têm apresentado resultados indicando ação inibitória sobre alguns tipos de tumores. Para explorar essa questão foram analisados os efeitos sobre células tumorais de carcinoma hepatocelular humano (HepG-2) do meio condicionado (MC) obtido do cultivo de CTM isoladas de tecido adiposo (TA), líquido amniótico (LA) e geleia de Wharton (GW). MÉTODOS Os MCs foram coletados após 24 horas de incubação das CTM sub-confluentes com ?-MEM contendo 20% de soro fetal bovino (SFB). Os MCs foram centrifugados e passados através de filtros de 0,22 ?M e armazenadas a -20 °C. O MC da própria célula HepG-2 foi utilizado como controle. Os efeitos dos MCs sobre a proliferação de células HepG-2 foram testados por ensaio MTT, em várias concentrações após 24 h de incubação. O ciclo celular de células HepG-2 tratadas com MC a 25%, 50% ou 75% foi analisado por citometria de fluxo (coloração IP) utilizando o software Modfit LT. A expressão dos genes bcl-2, bcl-6, CCND1 foi analisada por RT-PCR. A proliferação celular foi avaliada pela expressão das proteínas survivina, Bcl-2, PCNA e Ki-67 e pela quantificação de mitocôndrias com corante MitoTracker, assim como pelo potencial de membrana mitocondrial por corante JC-1 Mitoscreen utilizando equipamento de high content analysis. RESULTADOS Os meios condicionados de células-tronco de tecido adiposo (MC-TA) não alteraram a proliferação de células tumorais HepG-2 e os meios condicionados de células-tronco de líquido amniótico (MC-LA) e de geleia de Wharton (MC-GW) provocam aumento da proliferação, confirmada pela contagem de células com núcleos...

INTRODUCTION Cancer is a leading cause of death worldwide, accounting for about 8 million deaths per year, according to WHO data. Cancer deaths are caused by tumors that originate in organs such as lung, liver, stomach, bowel, breast and esophagus. The mesenchymal stem cells (MSCs) have been identified in many organs and studies of their interaction with tumor cells have shown results indicating an inhibitory effect on some types of tumors. To explore this question the effects of the conditioned medium (CM) obtained from mesenchymal stem cell isolated from adipose tissue (AT), amniotic fluid (AF) and Wharton jelly (WJ) on tumor cells of human hepatocellular carcinoma (HepG-2) were analyzed. METHODS The MSC CM was collected after 24 hours incubation of sub confluent MSC with ?-MEM containing 20% fetal bovine serum (FBS). The MSC CM were centrifuged and passed through 0.22 ?M filter and stored at -20° C. The CM of HepG-2 cell itself was used as control. The effects of contrast media on proliferation of HepG-2 cells were tested by MTT assay at various concentrations after 24 h of incubation. The cell cycle HepG-2 cells treated with CM at 25%, 50% or 75% was analyzed by flow cytometry (PI staining) using Modfit software LT. The expression of the genes Bcl-2, Bcl-6, CCND1 was analyzed by RT-PCR. Cell proliferation was assessed by the expression of survivin, Bcl-2, Ki-67 and PCNA proteins, and the quantization of mitochondrial by MitoTracker dye, as well as the mitochondrial membrane potential by JC-1 Mitoscreen dye using high content analysis equipment. RESULTS The conditioned media of mesenchymal stem cells (MSC) from adipose tissue (AT-CM) did not alter the proliferation of tumor HepG-2 cells and conditioned media of MSC cells from amniotic fluid (AF-CM) and Wharton jelly (WJ-CM) caused increased proliferation, confirmed by counting cells with nuclei stained with Hoechst 33342. The cell cycle analysis showed that exposure of HepG-2 cells to AF-CM...

Establishing a stem cell culture laboratory for clinical trials

Adult stem/progenitor cells are found in different human tissues. An in vitro cell culture is needed for their isolation or for their expansion when they are not available in a sufficient quantity to regenerate damaged organs and tissues. The level of complexity of these new technologies requires adequate facilities, qualified personnel with experience in cell culture techniques, assessment of quality and clear protocols for cell production. The rules for the implementation of cell therapy centers involve national and international standards of good manufacturing practices. However, such standards are not uniform, reflecting the diversity of technical and scientific development. Here standards from the United States, the European Union and Brazil are analyzed. Moreover, practical solutions encountered for the implementation of a cell therapy center appropriate for the preparation and supply of cultured cells for clinical studies are described. Development stages involved the planning and preparation of the project, the construction of the facility, standardization of laboratory procedures and development of systems to prevent cross contamination. Combining the theoretical knowledge of research centers involved in the study of cells with the practical experience of blood therapy services that manage structures for cell transplantation is presented as the best potential for synergy to meet the demands to implement cell therapy centers.

Monitoramento de serviços de hemoterapia no Estado de Säo Paulo, por meio de Unidades Desvio-Padräo (U.D.P.) e Medida Síntese / Säo Paulo's Blood Banks monitoring by means of Standard-Deviation Unitis and Synthesis-Measure

Objetivo: Avalia a aplicabilidade da metodologia de análise de dados baseada no uso da Unidade Desvio-Padräo (UDP) no monitoramento de serviços de hemoterapia do Estado de Säo Paulo. Métodos: Pesquisou-se o conjunto de serviços de hemoterapia do Estado de Säo Paulo que realizavam o processo hemoterápico completo no ano de 1997, totalizando 85 Unidades. Para a aplicaçäo da metodologia, foram desenvolvidos 28 indicadores específicos para avaliaçäo da atividade hemoterápica, onde o desempenho das Unidades em cada indicador foi comparado com a média do conjunto, usando-se como medida a Unidade Desvio-Padräo. Elaboraram-se cartas gráficas de análise. Para a avaliaçäo global de cada unidade, testou-se a Medida-Síntese proposta em trabalho anterior e criou-se nova fórmula para cálculo da Medida-Síntese, comparando-se os resultados. Resultados: A grande maioria dos indicadores (89 por cento) necessitou de alguma transformaçäo matemática e reexpressäo dos resultados para que o conjunto de valores se conformasse à curva normal. A Medida-Síntese de cada Unidade foi calculada e tabulada pelo método descrito e pelo método proposto, obtendo-se resultados diferentes quanto à classificaçäo das unidades. Conclusäo: A metodologia, suas modificaçöes e os resultados obtidos foram discutidos, concluindo-se pela aplicabilidade do método, complementando a avaliaçäo tradicional. As diferenças de classificaçäo resultantes da aplicaçäo dos métodos de cálculo proposto e citados foram associados à diversidade entre os objetos de análise de cada método